無洗滌均相免疫分析技術

Lumigen SPARCL是一項均相鄰近分析技術，採用閃光化學發光檢測，無需固相載體或洗滌步驟，可在30分鐘內完成檢測。 SPARCL技術能夠實現分析的小型化，適用於高通量篩選，同時保持高靈敏度和寬線性範圍。 SPARCL的溶液相動力學模仿了原生的體內環境，通過消除附著在固相上固有的變異性，從而產生更快、更準確的結果。 SPARCL可以自動化，並適用於多種應用，包括ELISA、蛋白質-蛋白質和蛋白質-核酸相互作用，以及高通量結合分析。 用這項突破性技術取代現有分析或實施新分析，邁向高通量篩選的未來。

30 分鐘內完成檢測

僅需一步抗原-抗體孵育，無需分離/洗滌，閃光化學發光即時產生信號。

成本效益高
無需包被板/磁珠、自動洗板機或其他昂貴檢測設備，減少試劑、樣本用量及儀器依賴。

靈活的實驗格式
適配溶液相或固相載體的多種檢測形式，可研究廣泛靶標。

減少廢棄物
無需洗滌，因此無需處理洗滌液。 與傳統ELISA相比，SPARCL每孔僅產生1倍孔體積的廢棄物（傳統ELISA為13倍）。

四步流程——30分鐘——無固相——無需洗滌

加入樣本和標記抗體 孵育5–30分鐘 加入背景還原劑 注入觸發劑，立即在化學發光儀上讀數

SPARCL與傳統ELISA檢測的對比

均相免疫分析

基於微孔板和磁珠的ELISA檢測需要對目標分析物進行兩次順序抗體結合：

1. 捕獲抗體與目標分析物的特異性結合;

2. 酶標記抗體（用於檢測）與同一分析物的特異性結合。

每一步結合都需要時間（30分鐘至1小時），且每步之後必須洗滌，以去除未結合或非特異性結合的物質（通常重複2–3次，確保徹底清除）。

而SPARCL檢測中，目標分析物與兩個特異性抗體的結合同時發生——未結合物質不影響結果，因此無需第二步結合和所有洗滌步驟。

固相載體

ELISA檢測需要將捕獲分子固定在固相載體上，以實現特異性結合分子與非結合分子的分離。 SPARCL檢測無需固定。

信號產生

傳統ELISA需要讓底物與酶反應長達30分鐘，再測量吸光度。 SPARCL檢測中，加入觸發劑後會即時產生閃光信號，信號強度與樣本中分析物的量成正比。

傳統ELISA檢測（夾心）

SPARCL檢測（夾心）

圖 1. 傳統ELISA 法與SPARCL法的工作流程比較。

SPARCL技術

空間鄰近分析物試劑捕獲化學發光（SPARCL）是一種依賴於接近性的化學發光技術，用於檢測兩個結合夥伴之間的特定結合相互作用或關聯。 在SPARCL實驗中，一個結合夥伴被標記上化學發光底物（吖啶），另一個結合夥伴則標記上辣根過氧化物酶（HRP），通過特定的結合事件將這兩個結合夥伴拉近到彼此接近。 由於吖啶與 HRP 酶的緊密接近，加入含有過氧化氫和增強劑的觸發溶液后，會生成一個閃光的化學發光信號。

圖2. 空間鄰近分析物試劑捕獲發光 （SPARCL） 技術的簡化原理示意圖

SPARCL應用場景

SPARCL可用於多種應用，檢測特定結合相互作用或兩個結合物之間的關聯，包括：

1.ELISA檢測

2. 夾心式

3. 直接式

4. 間接式

5. 競爭式

6.蛋白質-蛋白質、蛋白質-抗體、蛋白質-DNA、DNA-DNA相互作用

7.高通量結合檢測

8.細胞檢測

圖 3. 夾心法 – 溶液相

SPARCL 格式

液相或固相分析

SPARCL可以實現在有或沒有固相的形式中。 SPARCL 可應用於有或無固相的形式中。 使用固相時，吖啶化合物和特定捕獲抗體會連接到微粒或微孔板等固相表面; 如果不使用固相，則捕獲抗體直接與吖啶化合物標記。 液相形式無需包被板/磁珠，能改善動力學特性、縮短孵育時間，且因無固/液介面，更接近天然生物環境。

圖 4. 固相實驗

圖 5. 競爭式 – 液相

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